泛亚电竞的细胞培养条件: 气相要求为95%空气与5%二氧化碳，培养温度调控在37℃。在进行细胞传代时，首次建议以1:2的比例进行传代，每两天更换培养液。

注意事项: 建议一并购买培养用具，享受超值优惠。收到细胞后，待其处理至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后将细胞瓶放入超净台内进行严格的无菌操作。接下来，将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以使细胞状态稳定，然后再进行后续处理。通过显微镜观察细胞的生长情况，同时对细胞进行不同倍数拍照留存（推荐40x、100x和200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片默认为收到状态良好。

细胞培养步骤:

a. 细胞传代:

如果细胞的汇合度未超过80%，请先将瓶中培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养；如细胞密度已超80%，可进行细胞传代。请参照以下步骤进行贴壁细胞传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，再通过显微镜观察细胞的消化情况；若细胞大部分已变圆并脱落，迅速将其拿回操作台，轻轻敲击培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液并补加1-2ml完全培养基以重悬细胞。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶（分为两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后将其放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

对于悬浮细胞，传代步骤如下：

1. 半换液法: 竖立培养瓶静置于培养箱约1小时，轻轻吸出约3ml培养基，并补加3ml的完全培养基；如果培养基颜色变化较慢，可直接加入约500μl FBS。传代时可以直接补加5ml培养基并分为两个培养瓶，通常传代约3次后进行离心传代以去除死细胞。
2. 离心换液法: 如需分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀，再按1:2的比例分至新T25瓶中，添加6-8ml全新配置的完全培养基以维持细胞的生长活力，后续传代可按实际情况以1:2至1:5的比例进行。

b. 细胞冻存:

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，使用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞是否回缩变圆，确认后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使其脱落，之后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏:

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管的外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项: 有些细胞的贴壁性较差，运输过程中容易发生脱落，属正常现象。如脱落细胞较多，可将所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养，然后加入1-2ml胰酶轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止消化。再进行离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），最后补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。